高效液相色譜具有高壓、高效、高速、高靈敏度、高選擇性等特點(diǎn),廣泛應用于醫藥、環(huán)保、石化、食品、化工等行業(yè),是現在分離分析的重要方法,本文著(zhù)重介紹HPLC的工作原理、基本組成及高效液相色譜名詞術(shù)語(yǔ),使新學(xué)者快速了解高效液相色譜知識,在日常操作中理論與實(shí)踐結合,確保HPLC的高效運行、快速分析。
高效液相色譜由溶劑輸送系統(脫氣機、高壓泵等)、進(jìn)樣系統(定量泵、六通閥、定量環(huán)、進(jìn)樣針等)、分離系統(色譜柱等)、檢測系統(檢測器等)、記錄及數據處理系統。
高壓輸液泵:將流動(dòng)相在高壓下連續不斷地送入液路系統,具有有足夠的壓力,輸出流量恒定、可調,輸出壓力平穩,泵室體積小,泵體抗腐蝕、耐酸等特點(diǎn)。
在線(xiàn)脫氣機:四元低壓系統屬于泵前混合,由于在常壓下混合,極易產(chǎn)生氣泡,必須配有在線(xiàn)脫氣機,并要求流動(dòng)相使用前進(jìn)行脫氣。
進(jìn)樣系統:分為手動(dòng)進(jìn)樣系統和自動(dòng)進(jìn)樣系統, 主要由定量環(huán)、六通閥、進(jìn)樣針等部件組成。手動(dòng)進(jìn)樣系統的定量環(huán)用于準確定量,分為5μl、10μl、20μl等,需要根據不同進(jìn)樣量選擇合適的定量環(huán);自動(dòng)進(jìn)樣系統儀器自帶定量環(huán)多為100μl,如進(jìn)樣量大于定量環(huán)體積需咨詢(xún)相應儀器工程師更換定量環(huán)及計量泵等,六通閥是理想的進(jìn)樣部件,由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成,通過(guò)閥切換保證恒定的流速。
分離系統:包括色譜注、柱溫箱,連接管線(xiàn)等部件。
色譜柱一般用內部拋光的不銹鋼制成。其內徑為2~6mm,柱長(cháng)為10~50cm,柱形多為直形,內部充滿(mǎn)3~10 μm高效微粒固定相,根據不同的實(shí)驗需求需要選擇不同填料、不同規格的色譜柱。
柱溫箱:保證分離系統的溫度恒定,降低溫度波動(dòng)對色譜基線(xiàn)、保留時(shí)間及色譜分離的影響,包括普通柱溫箱及帶有冷卻功能的柱溫箱,普通柱溫箱可以根據方法需求設定高于室溫的溫度(一般應高于室溫5℃以上),降低柱壓或是改善色譜分離。
以上就是高效液相色譜結構的一些介紹,供大家參考!