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    色譜柱的使用壽命需如何延長(cháng)

    更新時(shí)間:2014-12-29    點(diǎn)擊次數:3165
     一、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒

    樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會(huì )引起柱壓的升高,而且也會(huì )引起柱效下降,因為篩板的堵塞會(huì )引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。 

    二、流動(dòng)相的pH應在使用的范圍內

    由于填料中存在Si-CSi-O鍵,流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì )導致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由于流動(dòng)相的pH 控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動(dòng)相的pH值。

    三、使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器

    樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會(huì )產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此,除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。

    如果確認色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,可選擇以下方式進(jìn)行補救:

    1、先在色譜柱前加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

    2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,然后反向使用。

    四、正確使用緩沖鹽

    緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會(huì )使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長(cháng)色譜柱使用壽命非常重要。

    正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話(huà):使用前要過(guò)濾,使用后要沖洗。具體方法如下:

    1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過(guò)夜。

    2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。

    注意:過(guò)渡流動(dòng)相是指有機相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,區別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。

    3、緩沖鹽析出的補救方法:

    1)方案1:用甲醇/20/801.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min

    2)方案2:用甲醇/=20/800.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜。

    五、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留

    強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會(huì )引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì )導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應,需要一定的時(shí)間才會(huì )體現出來(lái),但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì),因此要防止強保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 

    清洗方法:

    1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。

    2、使用過(guò)緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min

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